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    紫外可見(jiàn)分光光度計含量測定方法-上海奧析UV1800PC
    更新時(shí)間:2016-03-25 點(diǎn)擊次數:5116

    IgG含暈測定法

    (紫外可見(jiàn)分光光度計含量測定方法-上海奧析UV1800PC紫外-可見(jiàn)分光光度法)

    本法系依據免疫球蛋白G (IgG) 與相應的抗體特異

    性結合后,在適宜的電解質(zhì)、溫度、p H 條件下,產(chǎn)生凝

    集反應,形成抗原-抗體復合物,根據供試品的吸光度求

    出供試品中I g G的含量。

    試劑 1 )緩沖液稱(chēng)取三羥甲基氨基甲烷(Tris)

    12. 42 g ,氯化鈉9g、聚乙二醇6000 50g、牛血淸白蛋白

    (BSA) lg、*(NaN3) l g ,加水溶解,用l.Omol/L

    鹽酸調p H 值至7. 4,加水稀釋至1000ml。

    ( 2 )抗人I g G血清按說(shuō)明書(shū)要求將凍干抗人IgG

    清復溶,按標示效價(jià)取一定量抗人I g G血清,加緩沖液稀

    釋至抗體zui終效價(jià)為1 : 4 (例如抗人I g G血清效價(jià)為1 ••

    100,量取原液2 m l加抗體緩沖液48ml),充分混勻,

    0.45!11膜過(guò)濾。4°C保存備用。

    IgG標準品溶液的制備用生理氯化鈉溶液將I g G

    準品在每l m l0.2?6 . 0 m g范圍內做適當的系列稀釋

    (通常做5個(gè)稀釋度)。

    供試品溶液的制備用生理氯化鈉溶液將供試品稀釋

    成高、中、低3 個(gè)稀釋度,其I gG含量均應在標準曲線(xiàn)范

    圍內。測定法取供試品溶液1(^1,加人已預熱至37°C

    抗體液l m l ,混勻,每個(gè)稀釋度做2 管,置37°C水浴中保

    1小時(shí),充分混勻,照紫外-可見(jiàn)分光光度法(通則

    0401),在波長(cháng)3 4 0 n m處分別測定吸光度。

    I g G標準品溶液10M1替代供試品溶液,同法

    操作。

    計算標準品和供試品不同稀釋度溶液的吸光度的均

    值。以標準品溶液的I gG含量的對數對其相應的吸光度的

    對數作直線(xiàn)回歸,求得直線(xiàn)回歸方程,相關(guān)系數應不低于

    0.99;然后將供試品溶液吸光度的對數值代人直線(xiàn)回歸方

    程,求得值的反對數,再乘以稀釋倍數,求取每lml供試

    品溶液I gG含量,再由供試品各稀釋度I g G含量求平均

    值,即為供試品I gG含量(g/L) 。

    【附注】1 ) 全部反應管必須在1 0分鐘內測量完畢。

    ( 2 )設置紫外分光光度計狹縫寬度(Slit Width)

    2 n m 0

    ( 3 )每次測定可根據供試品I gG含量,適當調整標準

    品溶液中I gG含量范圍。

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