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    深入了解下分光光度計的使用原理
    更新時(shí)間:2020-10-28 點(diǎn)擊次數:3529
      分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。該儀器是實(shí)驗室、科研機構、醫療、農業(yè)、食品廠(chǎng)、飲用水廠(chǎng)等機構*檢驗設備。已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。分光光度計基本原理是指采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源,光源透過(guò)測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(cháng)度)成正比,其關(guān)系如下式:
     
      A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
     
      式中 :
     
      A 為吸光度;
     
      I。為入射的單色光強度;
     
      I 為透射的單色光強度;
     
      T 為物質(zhì)的透射率;
     
      k 為摩爾吸收系數;
     
      L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(cháng);
     
      c 為物質(zhì)的濃度。
     
      物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng),以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區,除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。

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