熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過(guò)對這些參數的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長(cháng)掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長(cháng)掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條、粉末)的光譜掃描。
熒光分光光度計的功能特點(diǎn):
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長(cháng)的光激發(fā)樣品,記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長(cháng)間的函數關(guān)系,即得熒光發(fā)射光譜。
2. 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長(cháng)記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長(cháng)的函數,即得熒光激發(fā)光譜。
3.時(shí)間分辨技術(shù);
可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測量。
時(shí)間分辨熒光測定公式如下:
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t):擬合指數函數
P0:強度取值
EXP:指數運算符
t:時(shí)間取值
τ:熒光平均時(shí)間壽命