分光光度計已在藥檢、醫療衛生、化學(xué)化工、環(huán)保地質(zhì)、冶金、石油、食品、生命科學(xué)、材料科學(xué)、農業(yè)科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域的科研、生產(chǎn)中 , 得到廣泛的應用。在定量分析、純度檢查方面更是*的分析儀器。從事分光光度計計量檢定幾年來(lái), 發(fā)現分光光度計使用中存在一些應注意的問(wèn)題。
1 應注意待測溶液濃度過(guò)高(即吸光度太大)或過(guò)低(即吸光度太小)對測試結果準確性的影響在實(shí)際工作中, 用分光光度計測溶液時(shí), 被測溶液濃度太高或太低都能產(chǎn)生比耳定律的偏離 ,從而使吸光度(透射比)誤差變大 。吸光度(透射比)誤差越大, 測量結果的可信性就越差。例如 :設某試樣的濃度為 C ,則由朗
伯—比爾定律: A =-1gT =εbc (1)式中 :A —物質(zhì)的吸光度;T —物質(zhì)的透光率 ;ε—物質(zhì)的吸光系數;b —被分析物質(zhì)的光程;c—物質(zhì)的濃度。

將(1)式微分 ,

則 :  
 -d1gT =0.434d1nT =-0.434dT =εbc (2) 
(1)式除(2)式 ,則:  
 dc = -0.434  =dT  (3)
   c  T1gT  
將(3)式以有限式表示 ,則: 
 c = -0.434 T  (4)
 c  T 1gT  
(4)式中 c 為濃度相對誤差, T 為透光度誤差。
  一般分光光度計的 T 約為 ±0.2 %～ ±2.0 %。若按目前大多數分光光度計廠(chǎng)家標準的規定, 取 T = 0.5 %,代入(4)式 ,則計算出不同透光率或不同吸光度值的濃度相對誤差由表 1 可知, 濃度測量的相對誤差大小和吸光度值所處的范圍關(guān)系很大。因此在測樣中 , 選擇適當的吸光度范圍非常重要。目前分光光度計使用者所使用的 721 、722 、723 、752 、756 等分光光度計的吸光度線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍都很小, 有的在(0.2 ～ 0.9)A 左右, 因此分光光度計的使用者應注意通過(guò)改變吸收池厚度或待測樣的濃度 , 使被測吸光度讀數在儀器的吸光度線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍內 ,從而減小比耳定律的偏離 ,得到較準確的測量結果。2 應注意儀器“0”點(diǎn)和基線(xiàn)的校準對測試結果準確性的影響儀器“0”點(diǎn)的校準主要針對可見(jiàn)分光光度計中,“0”點(diǎn)和“100 %”點(diǎn)分開(kāi)調校的儀器。有些分光光度計使用者在用分光光度計測樣時(shí), 當大幅度改變波長(cháng)時(shí) ,會(huì )稍等片刻,等燈熱平衡后 , 重新校準“100 %” 點(diǎn), 而忽視“0”點(diǎn)的重新校準。其實(shí)在大幅度改變波長(cháng)重新校準“100 %” 點(diǎn)后,“0”點(diǎn)的數值也改變了, 如果不進(jìn)行“0”校準 ,“0”點(diǎn)的數值將直接影響測試結果的準確性。正確做法應在大幅度改變波長(cháng)后 , 先重新校準“100 %”點(diǎn)再重新校準“0”點(diǎn)然后測樣。

基線(xiàn)的校準主要針對帶全波長(cháng)掃描功能的分光光度計。當分光光度計使用者使用波長(cháng)掃描功能對樣品測試、分析時(shí)(尤其當被測樣品濃度較小時(shí)), 就必須注意儀器基線(xiàn)的好壞對測試結果的影響。因為當基線(xiàn)偏離吸光度“0A”以下時(shí)(即發(fā)生負偏), 如果掃描分析的樣品濃度較小 ,吸光度峰值比較低 ,可能就檢測不出樣品值 ,從而影響到測試結果。所以在測量前應進(jìn)行基線(xiàn)校準(以空氣為參比樣)。而在基線(xiàn)校準后怎樣判斷基線(xiàn)是否校準成功,方法如下:首先選擇波長(cháng)掃描功能, 在掃描參數設置中 :將掃描模式為 :A(即吸光度), 吸光度量程將掃描速度設為:中速;波長(cháng)范圍設為 :實(shí)際需要波長(cháng)范圍;取樣間隔:1nm ;儀器光譜帶寬 2nm (無(wú)光譜帶寬調整擋的儀器不設)。