熒光法因其具有靈敏度高，取樣量少等特點(diǎn)，現已廣泛應用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、地理、冶金、醫學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個(gè)領(lǐng)域。熒光分析法的發(fā)展與儀器應用的發(fā)展是密不可分的。本文介紹了熒光分光光度計的結構、分類(lèi)、應用。熒光法的固有靈敏度高,取樣量少，檢測限通常比吸收光譜法低 1~3 個(gè)數量級,可達 ng ﹒ m l- 1 級；線(xiàn)性范圍也常大于吸收光譜,又有熒光壽命，熒光量子產(chǎn)率，激發(fā)峰波長(cháng)，發(fā)射峰波長(cháng)等多種參數因而有較好的選擇性。但也由于熒光法的高靈敏度,使得定量熒光法引入嚴重的基體干擾,熒光法在定量分析的應用不如吸收光譜法,因為吸收紫外可見(jiàn)光的物質(zhì)種類(lèi)要比吸收相應區域輻射而產(chǎn)生熒光的物質(zhì)多。目前熒光分析法廣泛應用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、地理、冶金、醫學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個(gè)領(lǐng)域。熒光儀器是用來(lái)測定熒光物質(zhì)的性質(zhì)和含量的分析儀器，通常分兩大類(lèi)：熒光光度計和熒光分光光度計。熒光分光光度計技術(shù)在現代科學(xué)的發(fā)展中正顯示出*的作用，越來(lái)越得到人們的重視。下面將對熒光分光光度計的結構，分類(lèi)，發(fā)展和應用作以簡(jiǎn)單介紹。

1 熒光分光光度計的結構

一般熒光分光光度計由光源、激發(fā)光源、發(fā)射光源、試樣池、檢測器、顯示裝置等組成。

1.1 光源

光源應具有強度大、適用波長(cháng)范圍寬兩大特點(diǎn),常用光源有高壓汞燈、氙燈、氙- 汞弧燈等。此外，紫外激光器、固體激光器、高功率連續可調染料激光器和二極管激光器等熒光光源把熒光法的應用范圍拓寬。

1.2 濾光片和單色器

在熒光光度計中，通常采用干涉濾光片和吸收濾光片作為激發(fā)光束和熒光輻射的波長(cháng)選擇器。在熒光分光光度計中至少選用一個(gè)，而常常是用兩個(gè)光柵單色器，且均帶有可調狹縫，以供選擇合適的通帶。理想的單色器應在整個(gè)波長(cháng)區內有相同的光子通過(guò)效率，不幸的是這種理想的單色器不存在。
 

1.3 檢測器

一般普通的熒光分光光度計均采用光電倍增管作為檢測器。它是很好的電流源，在一定條件下其電流量與入射光強度成正比。此外，還有光導攝像管、電子微分器、電荷耦合器陣列檢測器。

1.4 顯示裝置

以前，顯示裝置有數字電壓表，記錄儀和陰極示波器等，現在，人們可以通過(guò)計算機軟硬件技術(shù)根據不同要求，來(lái)選擇不同的直觀(guān)的視頻讀出方式。

2 熒光分光光度計分類(lèi)

熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計三個(gè)階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計等。
 

3  熒光分光光度計應用 
 理論上，具有剛性結構和平面結構的分子；π電子共軛體系的分子；給電子取代基的化合物都可用直接熒光法測定。間接熒光法測定是目標分析物本身不具備熒光發(fā)射能力,但具備使某種熒光物質(zhì)熒光猝滅的能力,或者可以通過(guò)氧化還原偶聯(lián)酶催化等手段使其轉化為熒光物質(zhì),而進(jìn)行間接測定。以下是熒光分光光度計在現代各科學(xué)領(lǐng)域中的應用：

3.1   環(huán)境檢測領(lǐng)域: 
熒光分光光度計檢測技術(shù)已經(jīng)成為環(huán)境污染監測中污染物定性和定量分析的有效手段。如不同類(lèi)型不
同場(chǎng)地的石油及其產(chǎn)品成份各有不同,其熒光光譜也有著(zhù)顯著(zhù)的區別,利用油標可在激發(fā) 310nm ,發(fā)射 365 nm處測量淤泥和海水中油污樣品中總油的含量.還可以對機油、柴油、重油、原油及液壓油進(jìn)行初步鑒定 ；空氣塵埃中多環(huán)芳烴的檢測。其他如陰離子表面活性劑作為洗滌劑污染的主要成份,葉綠素a、葉綠素b、脫鎂葉綠素 a 和脫鎂葉綠素 b 作為水環(huán)境浮游植物生物量和水體富營(yíng)養化的重要指標以及多環(huán)芳烴等都可用熒光分光光度計測量。 
 
3.2   食品和藥物成份分析領(lǐng)域： 
曾用熒光法分析食品和藥品中的化合物如：:維生素 A 、維生素 B1、B2（核黃素）、B6   、B1 2、維生素BC(葉酸或蝶酰谷氨酸)、維生素C、維生素D 、維生素E(生育酚)、維生素P(蘆丁)、維生素F（煙酸）、維生素 K，抗生素藥中的青梅毒、金霉素、四環(huán)素、抗霉素、鏈霉素和放線(xiàn)菌素D 等，抗瘧疾藥中的奎寧、瘧滌平、撲瘧母星、嘧啶甲胺和利凡諾等，麻醉藥中的大麻醇、嘜啶鹽酸鹽、四氫大麻醇、可待因、那可汀、吐根酚堿、依米丁、堿鹽酸鹽、毛果（蕓香）鹽酸鹽、弗勒可丁、二丁卡因、酸二乙胺等，鎮痛藥中撲熱息痛、阿司匹林、消炎痛吲哚美辛等，鎮靜藥中的氨基比林、苯并二氮雜卓、巴比妥、等以及吩噻嗪類(lèi)藥物、奎諾酮類(lèi)藥物、利血平、異煙肼、6 - 巰基嘌呤等。

3.3 醫學(xué)和生命科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域:

 多種氨基酸的分析、在肌肉和心臟疾病中非常注意細胞內離子濃度的測定；核糖核酸（R N A ）和
脫氧核糖核酸（D N A ）的相關(guān)研究，如 D N A 、R N A的檢測和定量，用以鑒別病毒細菌等的 DNA/酶相互作用研究，DNA 密碼的改變導致癌癥病因研究，能斷裂 DNA 限制酶測定，熒光PCR(DNA 的放大)的研究等;蛋白質(zhì)和酶的作用研究，如 DNA 的表達、細胞膜流動(dòng)性及細胞膜內蛋白質(zhì)研究、涉及抗體、蛋白質(zhì)和酶的ELISA 測定研究、酶活性測定等。尤其是各種新型蛋白和核酸熒光標記物的引入，各種熒光酶聯(lián)免疫分析技術(shù) 、偏振熒光測定技術(shù)以及為克服生物樣品紫外區背景熒光和散射光的嚴重干擾而提出的近紅外區熒光測定技術(shù)的發(fā)展，為醫學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域提供了豐富的研究手段。