檢定/校準可見(jiàn)分光光度計不容忽視的點(diǎn)

可見(jiàn)分光光度計是化學(xué)分析中常用的計量器具，它的準確與否直接關(guān)系到測量數據的可靠真實(shí)。所以檢定/校準的準確是計量工作中的重點(diǎn)。本文針對可見(jiàn)分光光度計的檢定/校準應關(guān)注的點(diǎn)進(jìn)行論述。

可見(jiàn)分光光度計是一種結構簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計，分析測量的原理是基于郎伯-比爾定律，利用樣品對單色光的選擇吸收特性來(lái)測量和記錄其吸收程度（吸光度），對樣品進(jìn)行定性和定量分析。其原理是：當一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時(shí)，當某一定頻率（或波長(cháng)）的可見(jiàn)光所具有的能級差相適應（即△E=E2-E1=hf）時(shí)，待測物將對該頻率（波長(cháng)）的可見(jiàn)光產(chǎn)生選擇性吸收。用可見(jiàn)分光光度計可以測量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定的條件下，吸光度 A與待測物質(zhì)的濃度 C及吸收池長(cháng)度 L的乘積成正比，即 A=KCL，所以，在測得吸光度 A 后，可采用標準曲線(xiàn)法、比較法以及標準加入法等方法進(jìn)行定量分析。由上可知在實(shí)際的檢定/校準過(guò)程中，關(guān)系到可見(jiàn)分光光度準確度主要有其波長(cháng)、配套的比色皿及用于檢測的計量標準器，關(guān)注這三個(gè)點(diǎn)對可見(jiàn)分光光度計的準確判定起到事半功倍的作用.

（1）可見(jiàn)分光光度計的波長(cháng)。檢定/校準前對可見(jiàn)分光光度計的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗室環(huán)境條件差，如磁光度計的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗室環(huán)境條件差，如磁路容易造成光路故障等因素，將其波長(cháng)置于 580nm處，狹縫置于 2nm范圍以?xún)?，用白色的濾紙置于光路中，觀(guān)察光斑的顏色，來(lái)將波長(cháng)大致調整至接近準確的范圍內。波長(cháng)調整后，按照規程的要求對波長(cháng)進(jìn)行檢定，當發(fā)現波長(cháng)超差時(shí)，可繼續調整波長(cháng)，直至檢測數據符合要求。

（2）要重視對比色皿成套性的檢定。在可見(jiàn)分光光度計的檢定/校準中，我們往往重視對其本身的檢定，而容易忽視對配套使用的比色皿成套性的檢定，這也是造成儀器分析結果偏離或超差的一個(gè)重要因素。很多可見(jiàn)分光光度操作人員由于對結構及分析原理了解不夠，也容易忽視這一問(wèn)題,從郎伯-比爾定律公式中不難看出，如果比色皿杯子的尺寸以及透光性發(fā)生變化，將直接影響檢測結果的準確性。在檢定/校準中，有時(shí)會(huì )遇到用戶(hù)反映檢測結果有問(wèn)題，懷疑是儀器波長(cháng)超差，但到現場(chǎng)經(jīng)我們認真反復對儀器進(jìn)行檢定后，發(fā)現儀器各項技術(shù)指標沒(méi)有大的問(wèn)題，基本符合規程的要求，再檢查溶液的配制，也沒(méi)有發(fā)現較大的問(wèn)題，zui后發(fā)現配套使用的兩個(gè)比色皿杯，從外觀(guān)上看顏色深淺不一致，經(jīng)檢定后發(fā)現兩個(gè)比色皿示值誤差在 10%左右，嚴重超差。經(jīng)詢(xún)問(wèn)得知，造成這兩個(gè)杯子顏色不一致的原因是：操作人員習慣做法是盛放參比溶液與盛放樣品溶液的比色皿長(cháng)期固定不變且不注意及時(shí)清洗，因而造成盛放樣品溶液的比色皿杯由于污染程度相對嚴重而使比色皿表面顏色變深，久而久之，兩個(gè)比色皿透射比出現較大的誤差。針對這一情況，我們告訴操作人員，配套使用盛放參比液比色皿與盛放樣品溶液的

比色皿不是固定不變的，可以互換使用，但必須保持清潔，用完后應及時(shí)用蒸餾水作參比檢查其成套性，其誤差不應超過(guò) 0.5%，這一點(diǎn)在規程上是有明確規定的，另外，比色皿透光面如遭到污染，應使用蒸餾水緩緩沖洗，然后再用潔凈而干燥的細布或鏡頭紙輕輕擦凈，不要用毛刷或濾紙等硬性物質(zhì)擦試，以免出現劃痕，造成比色皿報廢，使用完畢后，一定要及時(shí)給予清洗。清洗時(shí)，可用微量濃度的酸或一定濃度有機溶劑浸泡清洗，然后用蒸餾水沖洗，zui后應在干凈的環(huán)境中風(fēng)干，切勿用熱風(fēng)烘烤吹干，以免使吸收池形狀、尺寸發(fā)生微小變化，因而影響光程直至檢測結果。

（3）我們檢定使用的主標準器為濾光片，爭取得到更多的信息，以便靈活使用。在檢定中，遇到的大多數是進(jìn)口儀器，自動(dòng)化程度高，對儀器設定好使用條件，讓操作人員按部就班地操作，不允許隨意改變設定條件，以免儀器出現故障，但有時(shí)會(huì )給我們檢定工作帶來(lái)一定的困難，如何在這

種情況下進(jìn)行檢定工作，就需要我們靈活地使用檢定規程。

比如在檢定中，參考結果經(jīng)常是吸光度值而不是透射比值，而我們的規程和主標準器的檢定證書(shū)按常規給出的值卻是透射比值，這就為工作帶來(lái)不便。雖然二者之間可以互相換算，但在現場(chǎng)檢定中，為了更快、更便捷地了解儀器，我們的計量標準在上級部門(mén)檢定時(shí)，如果能在給出透射比標準值的同時(shí)再給出吸光度標準值更好。

結語(yǔ)

可見(jiàn)分光光度計屬于實(shí)驗室常用計量?jì)x器的一種，按國家檢定規程應定期檢定，進(jìn)行量值溯源。只有熟練地操作儀器，定期檢定，才能確保儀器波長(cháng)的準確度，從而才能保證測定的準確性，同時(shí)還能及時(shí)發(fā)現儀器存在的問(wèn)題。